Вакуумные пробирки для получения сыворотки

Сыворотка крови — наиболее часто используемый материал в КДЛ. Для получения сыворотки кровь должна полностью свернуться. Полное свертывание крови у пациентов, не принимающих антикоагулянты, происходит в среднем в течение 1 часа. Дальнейшее уплотнение сгустка происходит при центрифугировании. Для получения качественной пробы важно выдержать полное время свертывания крови. Если же кровь свернулась не полностью, то оставшийся после центрифугирования фибрин может изменять оптическую плотность пробы, а также засорять зонды анализаторов. Для ускорения процесса коагуляции используются активаторы свертывания — кремнезем и тромбин. В стеклянных пробирках функцию активатора свертывания выполняет непосредственно сама стеклянная стенка пробирки, так как в состав стекла входит кремний, ускоряющий процесс коагуляции. В пластиковые пробирки добавляются активаторы свертывания: кремнезем и/или тромбин. Внутренние стенки пробирок, как правило, покрыты силиконом для предотвращения адгезии клеток крови к поверхности стенок.

Микронизированный кремнезем — активатор свертывания, действующий на тромбоцитарное звено и плазменный гемостаз. Активатор свертывания используется в сывороточных пластиковых пробирках с гелем и без геля. Кремнезем — порошок, распыленный на внутренние стенки пробирки, который визуально определяется в виде мутного напыления внутри пробирки. Частицы кремнезема нерастворимы. Они наносятся на поверхность пробирки в виде спрея водного раствора с поверхностно-активным веществом (ПАВ). ПАВ улучшает дисперсию частиц кремнезема, а также способствует снижению адгезии клеток на стенки пробирки. Пробирки с активатором свертывания кремнеземом требуют обязательного перемешивания (5-6 раз). Перемешивание уменьшает время свертывания и усиливает стягивание сгустка и, следовательно, увеличивает объем получаемой сыворотки. Перемешивание также уменьшает концентрацию ПАВ и кремнезема в сыворотке (они остаются внутри сгустка).

Для получения сыворотки используются вакуумные пробирки без геля (имеют красно/белую кодировку крышек) и гелем (имеют желтую кодировку крышек).

1. Вакуумные пробирки для получения сыворотки без геля

Вакуумные пробирки для получения сыворотки имеют красно/белую кодировку крышек различаются и бывают двух видов — стеклянные и пластиковые. Кремнезем добавляется только в пластиковые пробирки, стеклянные вообще не содержат наполнителя. После взятия пробы крови в пластиковые пробирки, ее следует перемешать путем переворачивания 5-6 раз для лучшего контакта с активатором свертывания. Прежде чем центрифугировать пробирки с сывороткой, необходимо дождаться полного свертывания крови. Минимальное время полного свертывания в пробирках этого типа — 60 минут. Условия центрифугирования: 1300 g в течение 10 минут.

2. Вакуумные пробирки с гелем для получения и отделения сыворотки

Вакуумные пробирки с гелем производятся только из пластика, и их можно отличить по желтой крышке. С целью лучшего отделения сгустка крови от сыворотки в пробирки добавлен гель — специальный материал, предназначенный для образования стойкого барьера между клеточными компонентами крови и сывороткой во время центрифугирования). Гель специально расположен в пробирке таким образом (под наклоном), чтобы во время центрифугирования облегчалось его механическое движение и отделение сгустка крови от сыворотки. Специфический удельный вес геля подобран таким образом (между плотностью форменных элементов крови и плотностью сыворотки), что при центрифугировании гель «всплывает» над эритроцитами и располагается между форменными элементами крови и сывороткой. Гель твердеет, и образуется барьер между форменными элементами крови и сывороткой. Устойчивый барьер образуется через 5 минут после окончания центрифугирования пробы. В пробирку с гелем добавлен кремнезем в количестве, обеспечивающем полное свертывание крови в течение 30 мин. После взятия пробы крови в вакуумные пробирки с гелем, ее следует перемешать путем переворачивания 5-6 раз. Условия центрифугирования: 1500-2000 g в течение 10 мин. пробирки с гелем нельзя центрифугировать повторно, во избежание гемолиза пробы. При центрифугировании вакутейнеров с гелем нельзя пользоваться центрифугами с угловыми роторами, так как часть эритроцитов может попасть в сыворотку.

Преимущества вакуумных пробирок с гелем в отношении повышения эффективности выполнения анализов:

• сокращается время проведения анализа (нет необходимости ждать 1 час для завершения образования сгустка);
• «выход» сыворотки при центрифугировании больше (особенно важно это в педиатрии);
• центрифугировать надо только один раз;
• после центрифугирования пробу можно спокойно транспортировать без отделения от форменных элементов крови;
• возможно проведение анализа в первичной пробирке;
• можно переливать сыворотку в другие пробирки без применения пипеток;
• пробирки можно замораживать до -20°С.

Преимущества вакуумных пробирок с гелем в отношении повышения стабильности аналитов и чистоты образца:

• снижается вероятность гемолиза при центрифугировании;
• снижается вероятность присутствие латентного фибрина в сыворотке;
• увеличивается срок хранения образца;
• повышается стабильность аналитов (ферментов, электролитов, гормонов и др.) с 2 часов до 3 и более дней; например, стабильность АСТ, ЛДГ и калия сохраняется в течение 6 суток при температуре 4°C;
• возможно использование сыворотки для специальных анализов, особенно для исследования гормонов, таких как эстрадиол и прогестерон;
• возможно проведение лекарственного мониторинга в отношении целого ряда фармакологических препаратов;
• отсутствие воздействия на пробу факторов окружающей среды (микроорганизмы, окисление и т.д.);
• более точное соответствие полученных in vitro результатов исследования состоянию внутренней среды организма пациента (состоянию in vivo).

В силу приведенных преимуществ, использование вакуумных пробирок с гелем приводит к значительному снижению числа ошибок на преаналитическом этапе, поэтому их предпочтительно использовать при централизации лабораторных исследований.

3. Вакуумные пробирки для получения сыворотки с тромбином

Тромбин является природным активатором свертывания и значительно сокращает время образования сгустка до 3-5 минут. Тромбин используется в пробирках с оранжевой крышкой и может применяться для проведения всех исследований сыворотки, но чаще всего используется для экспресс-анализов. В пробирках с тромбином получается более очищенная сыворотка, чем в обычных пробирках. Производятся стеклянные пробирки, в которых содержится только тромбин, и пластиковые пробирки, в которых используется комплексный наполнитель — тромбин с кремнеземом. Также производятся пробирки с тромбином и гелем, время свертывания крови в которых 3-5 минут. После заполнения пробирки с тромбином кровью, ее следует обязательно перемешать путем переворачивания 5-6 раз. Полное свертывание крови происходит за 5 минут. Условия центрифугирования: пробирки без геля 1300 g в течение 10 минут, пробирки с гелем 1300-1500 g в течение 10 мин.

Пробирки с гелем нельзя повторно центрифугировать. При использовании пробирок с тромбином повышается качество пробы и снижается время, затрачиваемое на проведение теста в лаборатории. Эти пробирки являются идеальным решением для пациентов, находящихся на гемодиализе и получающих терапию гепарином.