Вакуумные пробирки для получения плазмы

В практике КДЛ для получения плазмы использую вакуумные пробирки с гепарином (наиболее часто для исследования биохимических показателей и показателей клеточного иммунитета) и с жидким трехзамещенным цитратом натрия (для исследования показателей гемостаза).

Основное действие гепарина — блокирование активности тромбина и, следовательно, торможение перехода растворимого фибриногена в нерастворимый фибрин. Гепаринизированную плазму обычно используют для биохимического и иммунологического анализа. Основное преимущество использования гепаринизировнной плазмы перед сывороткой заключается в сокращении времени на проведение анализа, поскольку в случае плазмы не нужно выжидать время полного свертывания крови. Пробирки с гепарином рекомендуется использовать в лабораториях с большим ежедневным потоком биохимических и/или иммунологических анализов. В вакуумных пробирках используется литиевая или натриевая соль гепарина, распыленная на внутреннюю поверхность пробирки. Гепарин лития используется для клинических анализов крови, гепарин натрия — при подборе дозы и мониторинге терапии препаратами лития. Концентрация гепарина — 17 МЕ на 1 мл пробы.

Крышки в вакуумных пробирках с гепарином имеют цветовую кодировку - зеленый/оранжевый и бывают без геля и с гелем.

При взятии образцов крови для исследования системы гемостаза стандартным антикоагулянтом является цитрат натрия, механизм действия которого основан на связывании ионизированного кальция крови, что ведет к обратимому блокированию процесса коагуляции.

1. Вакуумные пробирки для коагулологических исследований

В вакуумных пробирках для исследования системы гемостаза используется жидкий трехзамещенный цитрат натрия в концентрации:

• 0,105 моль/л; 3,13% (31,3 г/л);
• 0,109 моль/л; 3,20% (32,0 г/л);
• 0,129 моль/л; 3,80% (38,0 г/л).

При централизации исследований показателей гемостаза предпочтительнее использовать 0,109 моль/л (3,20%) тринатрийцитрат лимонной кислоты. Дозировка вакуума в пробирках для коагулологических исследований подобрана таким образом, чтобы обеспечивалось смешивание цитрата натрия с образцом в объемных долях 1:9 (1 часть цитрата и 9 частей крови). Выпускаются как стеклянные, так и пластиковые пробирки с цитратом натрия и крышкой бледно голубого/зеленого цвета.

Для предотвращения испарения цитрата натрия при хранении пластиковые пробирки производятся рядом компаний по особой технологии и имеют двойные стенки. Для проведения некоторых коагулологических анализов также могут использоваться пробирки с комплексным наполнителем Цитрат натрия/Теофиллин/Аденозин/Дипиридамол). Пробирки с этим наполнителем используются для обычных рутинных коагуляционных тестов, мониторинга терапии гепарином, анализе антигепаринового фактора тромбоцитов IV, β-тромбоглобулина. Пробирки с комплексным наполнителем не используются для анализа агрегации тромбоцитов. Соотношение антикоагулянт/кровь в этих пробирках остается 1:9 при концентрации раствора цитрата 0,109 М. Пробирки с комплексным наполнителем обеспечивают стабильность гепаринизированных образцов до 4 часов при комнатной температуре и соответствие результатов «in-vitro» концентрациям антикоагулянта «in-vivo».

При взятии проб крови в несколько пробирок у одного пациента пробирка с цитратом должна заполняться до пробирки с активатором свертывания. Очень важно соблюдать правильное соотношение кровь антикоагулянт в пробе с цитратом. Недостаток цитрата в пробе ведет к образованию микросгустков и/или коагуляции пробы, а избыток цитрата — к искажению результатов анализа за счет связывания кальция из реагентов. Сразу после взятия образца пробирку с цитратом необходимо аккуратного перемешать не менее 5 раз для предотвращения образования микросгустков.

Условия центрифугирования:

• стеклянные пробирки: 1500 g в течение 15 мин.
• пластиковые пробирки: 2000-2500 g в течение 10-15 мин.

2. Вакуумные пробирки с гепарином без геля

Вакуумные пробирки с гепарином без геля производятся как с гепарином лития, так и с гепарином натрия, цвет крышки — зеленый/оранжевый. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8­-10 раз. Центрифугирование следует производить сразу после взятия крови. Условия центрифугирования: 1300 g в течение 10 мин.

3. Вакуумные пробирки с гепарином и гелем

В пробирках с гелем используется только литиевая соль гепарина, цвет крышки — светло- зеленый. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8-10 раз. Центрифугирование следует производить сразу после взятия крови. Условия центрифугирования: 1500-2000 g в течение 10 мин.

Преимущества использования вакуумных пробирок с гепарином и гелем

• гелевый барьер способствует стабилизации большинства аналитов в течение 24 ч при комнатной температуре (кроме CO2 и глюкозы);
• после центрифугирования наблюдается существенное снижение количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов в плазме;
• после центрифугирования наблюдается уменьшение количества видимых невооруженным глазом агрегатов клеток/фибрина в плазме;
• после центрифугирования плазму можно транспортировать в первичной пробирке без дополнительного аликвотирования пробы.