Эякулят - Биологическое исследование

Биологическое исследование эякулята проводят в тех случаях, когда при клиническом, гинекологическом, урологическом и эндокринологическом обследованиях бесплодных супружеских пар не обнаруживается отклонения от нормы и предполагается их иммунологическая несовместимость.

Проба Симса - Гунера (посткоитальный тест).

Во время овуляции между 6 и 10 ч после полового сношения берут слизь из канала шейки матки, наносят на предметное стекло и накрывают покровным, которое со всех сторон заливают жидким парафином, после чего под микроскопом наблюдают за сперматозоидами. Пробу считают положительной, если в одном поле зрения выявляется не менее четырех подвижных сперматозоидов нормальной формы.

При нормальной плодовитости в 1 мл спермы должно быть выявлено (в счетной камере Горяева) не менее 20 млн. сперматозоидов, из которых 90 % должны быть подвижными в течение 8 ч после полового сношения. При наличии в 1 мл 3 млн. сперматозоидов и менее оплодотворение невозможно. Отрицательная проба (неподвижность или отсутствие сперматозоидов) может быть обусловлена слабой проникающей способностью сперматозоидов или невосприимчивостью секрета канала шейки матки к сперматозоидам. Поэтому для определения, у кого из супругов имеются нарушения, ведущие к бесплодию, необходимо проведение пробы Курцрока - Миллера в двух вариантах (с секретом канала шейки матки, обладающим нормальной восприимчивостью, и со сперматозоидами, обладающими нормальной проникающей способностью).

Проба Курцрока - Миллера.

Первый вариант. В день овуляции, установленный цитогормональным или другим путем, берут у обследуемой женщины, состоящей в бесплодном браке, слизь канала шейки матки, помещают ее на предметное стекло, накрывают покровным. Для предупреждения высыхания слизи края покрывного стекла смазывают вазелином, оставляя две щели. Перед одной щелью наносят каплю контроль ной спермы (взятой у здорового мужчины, т. е. с достаточной проникающей способностью сперматозоидов) таким образом, чтобы она соединилась со слизью канала шейки матки.

Приготовленный препарат помещают в термостат при температуре 37 °С на 6 ч, периодически просматривая его под микроскопом. При этом может быть выявлено следующее:

1) сперматозоиды не проникают в слизь канала шейки матки;

2) сперматозоиды проникают в слизь канала шейки матки, но быстро теряют подвижность и погибают;

3) сперматозоиды проникают в слизь канала шейки матки через пограничную зону и большой процент из них сохраняет нормальную подвижность в течение 6 ч.

В первом случае слизь канала шейки матки полностью невосприимчива к сперматозоидам, поэтому брак бесплоден «по вине» женщины. Во втором случае восприимчивость слизи канала шейки матки к сперматозоидам ограничена и поэтому брак бесплоден также по причине какой-либо патологии у женщины. В третьем случае слизь канала шейки матки имеет нормальную восприимчивость к нормальным (контрольным) сперматозоидам, поэтому брак бесплоден по «вине» мужчины, у которого сперматозоиды обладают слабой проникающей способностью.

Под восприимчивостью слизи канала шейки матки к сперматозоидам подразумевают ее способность пропускать в канал шейки матки сперматозоиды с нормальной проникающей способностью и способствовать сохранению их нормальной подвижности в течение не менее 6 ч. Восприимчивость слизи канала шейки матки является обязательным условием оплодотворения. Нарушение восприимчивости наблюдается при недостаточной продукции эстрогенов, воспалительных процессах в канале шейки матки и наличии у женщины спермоантител к сперматозоидам мужа.

Второй вариант. Определяют способность сперматозоидов проникать в слизь канала шейки матки. Для этого берут слизь канала шейки матки здоровой рожавшей женщины с нормальной восприимчивостью к сперматозоидам и сперму обследуемого мужчины, состоящего в бесплодном браке. Если оказывается, что сперматозоиды мужчины, состоящего в бесплодном браке, не проникают в слизь канала шейки матки здоровой женщины, то причиной бесплодия является слабая проникающая способность сперматозоидов.

Таким образом, причиной бесплодия может быть как отсутствие достаточной проникающей способности сперматозоидов, так и нарушение восприимчивости слизи канала шейки матки к сперматозоидам.

Микроагглютинация по Баскину.

Реакция основана на том, что во время полового сношения в результате резорбции в кровь женщины могут попадать ферменты сперматозоидов. В организме женщины под влиянием всосавшихся ферментов вырабатываются антитела, подавляющие подвижность сперматозоидов мужа.

Методика. У обследуемой женщины берут 3-4 мл крови из локтевой вены и сразу же центрифугируют для получения сыворотки. Одинаковым образом готовят суспензию сперматозоидов мужа и контрольную (здорового мужчины), центрифугируют и разводят осадок изотоническим раствором хлорида натрия так, чтобы 1 мл суспензии содержал 20 млн. сперматозоидов. Готовят на предметных стеклах четыре препарата:

первый - капля суспензии сперматозоидов мужа;

второй - капля суспензии контрольных сперматозоидов;

третий - капля сыворотки крови обследуемой женщины и капля суспензии сперматозоидов мужа;

четвертый - капля сыворотки крови обследуемой женщины и капля суспензии контрольных сперматозоидов.

Капли перемешивают, накрывают покровными стеклами, которые по краям парафинируют и помещают в термостат при температуре 37 °С на 6 ч. Через каждые 30 мин определяют подвижность сперматозоидов под микроскопом с окошком Фонио в окуляре при опущенном конденсоре.

Пробу считают положительной, если в третьем препарате процент кинезиса сперматозоидов значительно ниже, чем в остальных (контрольных) препаратах. Чем выше титр иммобилизирующих антител, тем быстрее снижается процентное содержание подвижных сперматозоидов и наступает полная иммобилизация сперматозоидов, тем выраженнее положительная реакция и менее вероятно оплодотворение.

Показатель плодовитости Фарриса.

Использование показателя Фарриса упрощает заключение исследования спермы. Определяют его по следующей формуле:

I =V • N • М / 100

где V - объем эякулята, мл; N - число сперматозоидов в млн в 1 мл; М - процентное содержание подвижных сперматозоидов. Показатель плодовитости Фарриса свыше 200 свидетельствует о пригодности спермы к оплодотворению.

Руководство к практическим занятиям по клинической лабораторной диагностике / Под ред. проф. М.А. Базарновой, проф. В.Т. Морозовой.— К.: Выща школа, 1988.— 318 с., 212 ил.